Сельскохозяйственная биотехнология-стр.75

При проведении работ по криосохранению необходимо, прежде всего, учитывать специфику растительных клеток: отбирать мелкие клетки, с маленькой вакуолью и пониженным содержанием воды; разрабатывать в каждом отдельном случае подходы замораживания и последующего оттаивания растительных клеток. При криосохранении встречается ряд трудностей, одна из которых связана с защитой замораживаемых клеток и тканей от осмотического стресса и механического разрушения структур в результате образования и роста кристаллов льда внутри клетки. Одновременно с этим необходимо правильно подбирать условия, обеспечивающие высокую выживаемость клеток при оттаивании и рекультивации.

Несмотря на многообразие работ в этом направлении, в них все же наметились общие приемы, лежащие в основе криосохранения: обработка клеток перед замораживанием, применение криопротекторов, соблюдение определенного режима замораживания в интервале от 0 до -40° С (в редких случаях до -70° С), а также специальные предосторожности при оттаивании объектов.

Процесс криоконсервации, как правило, начинается с подготовки культуры клеток к замораживанию. Это может быть достигнуто несколькими способами, предусматривающими культивирование клеток на питательных средах, содержащих различные осмотически активные вещества: маннит или сорбит в концентрации 2-6%, аминокислоты и среди них, в первую очередь, пролин, чье значение для связывания воды в клетках растений широко известно, а также у-aминомасляная кислота.

Подбор криопротекторов, веществ, уменьшающих повреждение клеток от осмотического и механического стресса, проводят эмпирически по принципу наименьшей токсичности и оптимального эффекта. Среди всех известных криопротекторов выделяются такие легко проникающие в клетки вещества, как ди-метилсульфоксид (ДМСО, 5-10%), глицерин (10-20%), а также непроникающие высокомолекулярные-поливинилпироли-дон (ПВП), декстран, полиэтиленгликоль (ПЭГ) с молекулярной массой 6000.

Другие материалы

Мир томата глазами фитопатолога-стр.77

Фото 1-44. Растрескивание плодов: а - появление внутренней полости под эпидермой, б-г - кольцевые и радиальные микротрещины, д - оспа на плодах, е - сетчатые микротрещины, ж - кольцевое (поперечное) глубокое растрескивание (фото А.В.Трусевича), з - глубокое сетчатое растрескивание, и - радиальное растрескивание плода.