Сельскохозяйственная биотехнология-стр.254

Животных, несущих в своем геноме рекомбинантный (чужеродный) ген, определяют как трансгенных, а интегрировавшийся в геном рецепиента ген - как трансген. Продукт этого гена - белок-является трансгенным продуктом.

С помощью переноса генов при синтезе рекомбинантных белков можно добиться изменения некоторых свойств организма, придать ему новые качества. При передаче трансгена по наследству потомству возможно создание трансгенных линий животных.

Создание и выделение трансгенов, их клонирование являются объектом исследований генных инженеров, и поэтому эти вопросы не рассматриваются в данном учебном пособии.

После выбора и приобретения необходимой генной конструкции получение трансгенных сельскохозяйственных животных можно разделить на следующие этапы.

1. Приготовление раствора ДНК для микроинъекции.

2. Подготовка доноров и извлечение эмбрионов.

3. Визуализация пронуклеусов в эмбрионах сельскохозяйственных животных и микроинъекция ДНК.

4. Пересадка инъецированных эмбрионов в яйцеводы или (после промежуточного культивирования) в матку синхронизированных реципиентов.

5. Доказательство интеграции у родившихся потоков и, если возможно, первое исследование экспрессии трансгена на уровне транскрипции (РНК) и трансляции (протеин).

6. Получение трансгенных потомков с использованием методов традиционного животноводства.

Приготовление раствора ДНК для микроинъекций. В растворе ДНК для микроинъекции должны отсутствовать механические примеси, которые могут вызвать закупоривание инъекционной пипетки или повреждение инъецируемых клеток. Растворы, соприкасающиеся с ДНК, предварительно стерилизуют, а посуду тщательно промывают. Конечную концентрацию ДНК устанавливают таким образом, чтобы в 1 пкл инъекционного раствора содержалось более 100 копий генной конструкции. Обычно используют раствор с концентрацией 1000 копий в 1 пкл. Для фрагментов ДНК длиной от 5 до 8 кб в 1 мл содержатся 100 копий при концентрации 1-2 мкг/мл. Связь между количеством инъецируемой ДНК и числом интегрировавшихся копий не обнаружена. Готовый для инъекции раствор ДНК хранят в замороженном состоянии.

Другие материалы

Мир томата глазами фитопатолога-стр.465

Морфология. Бабочка в размахе крыльев достигает 30- 10мм, передние крылья серовато-жёлтые с примесью красноватых, розовых или зеленоватых оттенков. Круглое и почковидное пятна на передних крыльях тёмно-серые, неясные. Задние крылья светлее передних, с бурой полосой у внешнего края, посредине тёмное луновидное пятнышко.

Самка откладывает светло-жёлтые яйца на кормовое растение. Гусеницы вырастают длиной до 40мм, изменчивой окраски: от чёрной, коричневой и зелёной до жёлтой и почти белой. Вдоль тела идут три широкие тёмные полосы (фото 3-96).