Сельскохозяйственная биотехнология-стр.204

Модификация метода кокультивации протопластов с А. tumefaciensе позволила повысить его эффективность (до 10'1) и сократить время получения трансформантов до трех недель. При этом в качестве селективного признака использовали то обстоятельство, что только трансформированные клетки способны расти без добавок фитогормонов.

Микроинъекции Д Н К ■ В ряде экспериментов было показано, что метод микроинъекций может успешно применяться для трансформации растительных клеток аналогично микроинъекциям животных клеток (см. с. 189). Это стало возможным после преодоления ряда технических трудностей, в частности, разработки метода получения протопластов для инъекций путем прикрепления их к стеклам полилизином.

Для микроинъекций применяется микроигла с внешним диаметром 2 мкм и внутренним 1 -1,25 мкм. Объем инъекций в каждый протопласт составляет (1 -10)* 104 мл, при концентрации ДНК-0,1-1,0 мкг/мкл.

Трансформация растительных клеток происходит с эффективностью 10-20%, независимо от типа вектора. В этом смысле метод можно рассматривать как наиболее универсальный. Важно также, что трансформация не является видоспецифичной, и ее можно применять, когда другие способы переноса генов невозможны (например, агробактерии имеют ограниченный круг хозяев). Многие исследователи полагают, что м.икроинъек-ции пригодны для всех типов растений.

Эл ектропорация. Этот метод основан на том, что импульсы высокого напряжения обратимо увеличивают проницаемость биомембран. Для растительных протопластов процедура электропорации оказалась очень эффективной. Метод состоит в следующем: на растительные протопласты в высоких концентрациях, находящиеся в среде электропорации, содержащей ДНК, действуют высоковольтным импульсом. В результате молекулы ДНК поглощаются клетками через поры в клеточной мембране. Далее после разведения протопласты высеваются на соответствующую среду для проращивания. Эффективность переноса определяется через 24-48 ч после электрошока (напряжение 200-350 В, длительность импульса 54 мс).

Другие материалы

Пищевая химия-стр.214

Натрий естественно присутствует во всех пищевых продуктах. Способ получения пищевых продуктов в значительной мере определяет конечное содержание в нем натрия. Например, замороженный зеленый горошек содержит гораздо больше натрия, чем свежий. Свежие овощи и фрукты содержат его от менее чем 10 мг/кг до 1 г/кг, в отличие от круп и сыра, которые могут содержать натрий в количестве 10-20 г/кг.