Сельскохозяйственная биотехнология-стр.201

Небольшой размер генома CaMV дает возможность манипулировать in vitro с вирусной ДНК, как с бактериальной плазмидой, и затем вводить ее в растения путем втирания в листья. Инфицирование небольшого числа клеток приводит к заражению всего растения, так как вирус быстро распространяется, передаваясь от клетки к клетке. При использовании 1-5 мкг клонированной ДНК для инфицирования одного растения посредством механической инокуляции достигается почти 100%-ная эффективность инфекции.

Для клонирования ДНК CaMV в Е. coli используют плаз-мидные векторы Е. coli, например, pBR 322. После обработки соответствующими рестриктазами ДНК CaMV и pBR 322 и лигирования образуется гибридная плазмида, способная к амплификации в Е. coli.

Прямая интеграция ДНК CaMV в геном хозяина после инфекции не показана. Разработан методический прием - агроинфекция, позволяющий осуществить прямое встраивание вирусной ДНК после инокуляции. Для этого геном CaMV встраивается в Т-ДНК и в ее составе интегрирует в ядерный геном различных растений.

К преимуществам векторных систем на основе вирусов можно отнести следующие: малый размер генома, что дает возможность легко манипулировать вирусной ДНК; высокая ко-пийность вирусной ДНК в клетках зараженных растений (до 50 ООО на клетку); наличие сильных промоторов, которые могут обеспечить эффективную экспрессию чужеродных генов.

Среди недостатков следует отметить небольшую емкость вектора (менее 800 н. п.) и ограниченный круг хозяев - крестоцветные. Емкость вектора можно увеличить до 800-1000 н. п., если инфицировать вирусом растительные протопласты. В этом случае инфекция не передается от клетки к клетке и нет необходимости в упаковке ДНК в частицы. Таким образом, часть вирусного генома, ответственная за упаковку в вирусные частицы, может быть удалена и замещена чужеродной ДНК-

Другие материалы

Микробиологические основы технологии шампанизации вина-стр.208

В период контрольной выдержки крайне редко наблюдается помутнение шампанского, вызываемое как культурными, так и «дикими» дрожжами: Saccharomyces bayanus, Saccharomyces cere-visiae, Brettanomyces intermedius, Saccharomycodes ludwigii, Candida valida, Pichia membranaefaciens.

Данные, полученные при микробиологическом анализе всех технологических этапов шампанизации вина, показали наличие одних и тех же видов дрожжей. На видовой состав дрожжей не оказывают существенного влияния климатические условия и сезонность.