Сельскохозяйственная биотехнология-стр.193

Таким образом были инъекцированы гены интерферона и инсулина человека, ген глобина кролика, ген тимидинкиназы вируса простого герпеса и кДНК вируса лейкемии мышей. Число молекул, вводимое за одну инъекцию, колеблется от 100 до 300 000, а их размер - от 5 до 50 кб. Выживает обычно 10-30% яйцеклеток, а доля мышей, родившихся из трансформированных яйцеклеток, варьируется от нескольких до 40%. Таким образом, реальная эффективность составляет около 10%.

Интеграция чужеродных генов неспецифична по отношению к хромосомам, а число копий чужеродного гена может различаться от нескольких штук до 100 и более. Эти гены образуют группу тандемных повторов, объединенных по типу «голова к хвосту». Чужеродная ДНК после инъекции была обнаружена как в соматических, так и в половых клетках. Это означает, что интеграция проходит на самых ранних стадиях развития зиготы. В нескольких случаях гетерологичная ДНК наследовалась в трех поколениях мышей, что свидетельствует о стабильной интеграции. Интегрировавшая в половые клетки ДНК передается как менделевский ген.

Установлено, что уровень экспрессии чужеродного гена зависит от места интеграции ДНК с хромосомами и от степени ее метилирования, а также от дифференцировки тканей. В некоторых случаях удалось получить тканеспецифическую экспрессию. Важно отметить, что специфические чужеродные гены можно встраивать в геном клетки таким образом, что они подчиняются нормальным регуляторным сигналам.

Примечательными в этом отношении являются результаты экспериментов с гибридным геном, состоящим из 5-концевого регуляторного участка гена металлотионина (МТ) мыши и последовательности, кодирующей гормон роста (GH) крысы. Была получена гибридная плазмида, pMG Н, состоящая из плазмиды pBR 322, к которой была пришита конструкция, состоящая из регуляторной зоны гена МТ и структурной части гена GH. При инъекции использовали линейную форму плазмиды размером 5 кб, предполагая, что линейные фрагменты со свободными концами встраиваются в клеточную ДНК эффектив нее, чем кольцевая плазмида. В каждый пронуклеус было введено по 600 копий гибридного гена, и в матки приемных матерей имплантировано 170 оплодотворенных яйцеклеток, из которых развилась 21 мышь. У семи из них методом блот-гиб-ридизации были обнаружены множественные копии гена MGH Шесть из этих мышей росли быстрее, чем нормальные животные того же помета. Содержание гормонов у них в 100-300 раз превышало его содержание в организме контрольных мышей. Таким образом, интеграция и экспрессия гибридного гена обеспечивает ускоренный рост и большой размер этих мышей. Эксперименты такого рода в перспективе могут найти прямое практическое применение, и не за горами выведение пород скота с измененными ростовыми показателями.

Другие материалы

Технологические правила виноделия-стр.274

4.5.4 Окончательную отмывку сорбента заканчивают пропусканием 5-10 к.о. дистиллированной воды до достижения значения pH на выходе из колонны 3,2-3,4.

4.5.5 При достижении значения pH = 3,2-3,4 колонна, загруженная регенерированным сорбентом, запускается снова в рабочий режим.

4.6 Между циклами сорбент «Термоксид-ЗА» хранят под слоем дистиллированной воды при температуре 10-20°С. Количество циклов «сорбция-десорбция» определяют, исходя из сорбционных свойств сорбента (ВТУ 067-92).

5. ТРЕБОВАНИЯ К ТЕХНОЛОГРИЕСКОМУ ОБОРУДОВАНИЮ