Сельскохозяйственная биотехнология-стр.186

Рис. 3.16. Структура плазмиды pBR 322

синтеза нужного белка. Его количество может достигать 10% суммарного белка, синтезируемого бактериальной клеткой.

Эффективной экспрессии генов в составе плазмиды можно также достичь и за счет некоторых других мощных регулируемых промоторов, например: 1) Тгр-промотора триптофанового оперона, который регулируется репрессором и может регулироваться 3-индолилуксусной кислотой или триптофановым голоданием; 2) Ьас-промотора лактозного оперона, который также регулируется репрессором и может индуцироваться субстратом (лактозой); 3) гибридного trp-lac(tac)-np0M0T0pa, который регулируется 1ас-репрессором.

Последовательность Шайна - Дальгарно и расстояние от нее до инициирующего кодона существенным образом влияет на эффективность трансляции. Обычно эту последовательность включают в состав самого вектора вместе с инициирующим кодоном на нужном расстоянии. При экспрессии векторов такого типа образуется гибридный белок, в котором несколько N-koh-цевых аминокислотных остатков происходят от прокариотического гена - источника регуляторных элементов и инициирующего кодона. Гибридные белки часто более стабильны, а химическая или ферментативная обработка позволяет выделить эукариотическую часть белка.

На эффективность продуктивности рекомбинантной ДНК в существенной степени влияет число копий этой ДНК в расчете на клетку. Суммарная активность экспрессируемого гена растет с ростом копийности плазмиды. Таким образом, используя многокопийные плазмиды, можно достичь сверхсинтеза нужных белковых продуктов. Обычно используемые плазмидные векторы (pBR 322 и др.) поддерживаются в клетке в количестве 20-50 копий. Сейчас исследователи имеют в своем распоряжении температурно-чувствительные мутантные плазмиды, способные накопить до одной-двух тысяч копий на клетку, не нарушая ее жизненно важных функций. Таким образом можно достичь сверхпродукции плазмидных генов бактериальными штаммами-сверхпродуцентами. Это и представляет собой краеугольный камень биотехнологии, поскольку может давать существенный экономический эффект.

Другие материалы

Технология солода и пива-стр.795

■ с помощью разделения толканием, при котором бутылки, сталкиваясь, вращаются и царапают одна другую, пока, наконец, им не удастся выстроиться в один ручей, или, что предпочтительнее,

■ путем разделения без давления при помощи применения различной скорости движения отдельных тяговых цепей конвейера, при котором бутылки по слегка наклонным цепям скользят вдоль ограждения и по принципу действия застежки-молнии щадящим образом втягиваются в ручей одна за другой. При этом опрокинувшиеся бутылки и осколки сдвигаются в сторону.