Сельскохозяйственная биотехнология-стр.185

Однако удобнее встраивать ген в специальный вектор для экспрессии, который уже содержит регуляторные элементы, обеспечивающие активную экспрессию после введения рекомбинантной плазмиды в бактериальную клетку. К таким эффективным регуляторным участкам относится, например, сильный промотор гена Р-лактамазы (это ген устойчивости к ампициллину, входящий в состав плазмиды pBR 322). Ряд генов, в том числе и ген инсулина, встраивали в сайт рестрикции Pst 1, который расположен в структурной части гена. Промотор этого гена обеспечивает эффективную транскрипцию, которая продолжается до тех пор, пока РНК-полимераза не дойдет до сигнала терминации встроенного гена. В результате трансляции был получен химерный полипептид Р-лактамазаинсулин, из которого после удаления аминокислотной последовательности р-лактамазы удалось получить биологически активный инсулин.

Промотор гена р-лактамазы нерегулируемый, а использование таких промоторов не всегда удобно. Дело в том, что большое количество белка может блокировать рост бактерий. Кроме того, интенсивная транскрипция рекомбинантной ДНК может помешать репликации плазмиды, и она будет утрачена. Поэтому удобнее использовать регулируемые сильные промоторы, включение которых, а значит, и синтез чужеродного белка можно осуществить, когда получена большая бактериальная масса. К таким промоторам относится термочувствительный промотор рL, который ответствен за экспрессию нескольких генов бактериофага. Белок-репрессор, блокирующий действие этого промотора, активен при 31° С, но неактивен при 38° С. Таким образом, при инкубировании бактерий при 31° С чужеродный ген не экспрессируется. При повышении температуры pL-penpeccop инактивируется и наблюдается высокий уровень

Другие материалы

Технология солода и пива-стр.674

Чтобы правильно проконтролировать стенки бутылки, в карусельной инспекционной машине бутылка поворачивается на 360" перед источником света, и за время ее вращения CCD-матричной камерой снимается цифровое изображение поверхности стенок бутылки в девяти кадрах со шкалой, имеющей 256 оттенков серого цвета.

Оценка полученной картинки происходит в максимум 10 инспекционных окнах, причем для каждого окна может быть избран особый алгоритм с различной чувствительностью; например, бутылки с явно выраженным износом здесь будут отсортированы.