Сельскохозяйственная биотехнология-стр.185

Однако удобнее встраивать ген в специальный вектор для экспрессии, который уже содержит регуляторные элементы, обеспечивающие активную экспрессию после введения рекомбинантной плазмиды в бактериальную клетку. К таким эффективным регуляторным участкам относится, например, сильный промотор гена Р-лактамазы (это ген устойчивости к ампициллину, входящий в состав плазмиды pBR 322). Ряд генов, в том числе и ген инсулина, встраивали в сайт рестрикции Pst 1, который расположен в структурной части гена. Промотор этого гена обеспечивает эффективную транскрипцию, которая продолжается до тех пор, пока РНК-полимераза не дойдет до сигнала терминации встроенного гена. В результате трансляции был получен химерный полипептид Р-лактамазаинсулин, из которого после удаления аминокислотной последовательности р-лактамазы удалось получить биологически активный инсулин.

Промотор гена р-лактамазы нерегулируемый, а использование таких промоторов не всегда удобно. Дело в том, что большое количество белка может блокировать рост бактерий. Кроме того, интенсивная транскрипция рекомбинантной ДНК может помешать репликации плазмиды, и она будет утрачена. Поэтому удобнее использовать регулируемые сильные промоторы, включение которых, а значит, и синтез чужеродного белка можно осуществить, когда получена большая бактериальная масса. К таким промоторам относится термочувствительный промотор рL, который ответствен за экспрессию нескольких генов бактериофага. Белок-репрессор, блокирующий действие этого промотора, активен при 31° С, но неактивен при 38° С. Таким образом, при инкубировании бактерий при 31° С чужеродный ген не экспрессируется. При повышении температуры pL-penpeccop инактивируется и наблюдается высокий уровень

Другие материалы

Сельскохозяйственная биотехнология-стр.295

Более высокий коэффициент использования сырья обычно достигается при выращивании грибов на гидролизатах растительных отходов и жидких отходах деревообрабатывающей целлюлозно-бумажной промышленности. Для этого применяю! метод глубинного культивирования, как и при выращивани| кормовых дрожжей. Содержание белков в грибной массе, вы ращенной на жидкой питательной среде, может достигать 50-60% от сухой массы. В целях более полного использования сырья также практикуется совместное культивирование грибов и бактерий.