Сельскохозяйственная биотехнология-стр.180

Другой прием - иммунный скрининг колоний, т. е. поиски клона, который синтезирует нужный белок с помощью радиоактивных антител к нему. Этот метод осуществим в том случае, когда ген экспрессируется в составе рекомбинантной плазмиды.

Выбор нужного гена из клонотеки - второй из наиболее распространенных способов получения гена. В этом случае задача исследователя сводится к поиску среди миллионов бактерий тех, которые содержат фрагмент ДНК с интересующим его геном. В настоящее время для решения такой задачи применяются молекулярные зонды (пробы). Зонд представляет собой меченую молекулу нуклеиновой кислоты или белка, имеющую сродство к самому гену или его продукту, соответственно.

Индивидуальная радиоактивно меченая мРНК служит хорошим зондом для выявления бактериальных колоний, несущих искомый ген. Однако, как мы уже отмечали, индивидуальную мРНК в чистом виде удается выделить в ограниченном числе случаев, как правило, в специализированных клетках, где данная мРНК синтезируется в значительных количествах. Например, в предшественниках эритроцитов больше половины всей мРНК представлено глобиновой мРНК.

В других случаях для выделения зонда прибегают к созданию банка кДНК, кодирующую данный белок, даже в условиях тысячекратного избытка других молекул мРНК, присутствующих в той же клетке.

Иногда продукт (а значит, и мРНК) искомого гена присутствует в клетке в столь мизерном количестве, что получить индивидуальную РНК не удается. Тогда можно выделить небольшое количество чистого белка и определить аминокислотную последовательность некоторой его части (обычно достаточно знания участка белковой молекулы длиной 5-6 аминокислотных остатков). По известной аминокислотной последовательности можно, установить все возможные последовательности нуклеотидов в том участке мРНК, который кодирует данную аминокислотную последовательность. Затем из отдельных радиоактивно меченых нуклеотидов химически синтезируют олигонуклеотиды длиной не менее 16 звеньев, один из которых полностью комплементарен участку искомого гена. Такие нуклеотиды и являются пробами для поисков нужных клонов к ДНК-

Другие материалы

Технология солода и пива

Во всеобъемлющем пособии-справочнике, выдержавшем 8 изданий в Германии и переведенном на многие языки, содержатся сведения, необходимые для работы любого пивовара. Подробно рассмотрены типы и виды необходимого сырья, используемое оборудование, вопросы оценки качества пива. Большое внимание уделено проблемам водоподготовки, стойкости пива, его розливу в различные виды тары, а также проблемам энергообеспечения предприятий солодовенной и пивоваренной промышленности.