Сельскохозяйственная биотехнология-стр.176

Рис. 3.9. Клонирование ДНК в векторе на основе бактериофага к:

/ - участок, ие нужный для репликации Я.-ДНК 2 - фрагменты содержат всю информацию для репликации в Е. coli, но хромосома мала для упаковки таются интактными. Концевые фрагменты отделяют от остальных фрагментов и используют для получения новых-подобных фагов, содержащих на месте вырезанной фаговой ДНК вставку чужеродной ДНК размером около 15 кб.

Для созревания фаговой частицы ее хромосома должна иметь длину около 45 кб. Это обстоятельство оказалось весьма удобным при отборе рекомбинантных фагов. Размножаются только те фаги, которые содержат оба конца фаговой хромосомы и вставку чужеродной ДНК подходящей длины (15-20 кб) (рис. 3.9). Фрагменты чужеродной ДНК получают ферментиро-ванием высокополимерной хромосомной ДНК при помощи ре-стриктаз. Рестриктазу и режим обработки ДНК подбирают таким образом, чтобы размер полученных фрагментов приблизительно соответствовал емкости вектора. Полный гаплоидный набор хромосом клетки млекопитающего содержит около 3* 109 пар оснований. При емкости вектора 15 кб проверка миллиона фаговых бляшек позволяет проверить весь геном на присутствие данного гена. Но для этого нужно иметь соответствующий «зонд» (см. далее).

Для выделения и исследования более длинных генов или группы соседних генов с прилежащими к ним последовательностями необходимо клонировать фрагменты ДНК еще большей длины (30-40 кб). Такой емкостью обладают плазмиды-косми-ды, содержащие cos-участок генома фага, участвующий в упа ковке ДНК в фаговую частицу на конечной стадии развития. Как оказалось, для упаковки ДНК необходимо, чтобы ДНК содержала cos-участок и размер ее должен быть примерно равным размеру генома фага (около 45 кб). Следовательно, к кос-миде можно пришить клонируемую ДНК значительных размеров (30-40 кб). Фаговые головки, содержащие такую рекомбинантную ДНК, не могут размножаться, как фаги. Ими с весьма высокой эффективностью трансформируют клетки Е. coli. Гибридная молекула, содержащая эукариотическую ДНК, обрамленную cos-сайтами, размножается в Е. coli как плазмида, и каждая фаговая частица вызывает образование колонии индивидуального бактериального трансформанта. Использование космид позволяет получать клонетки практически любых организмов, ограничиваясь не более 2-5*10э клонами. Геномные библиотеки используют для выделения генов.

Другие материалы

Сахарно-крахмальная заварная мастика

Более пластичной мастикой, чем сахарная сырцовая, является сахарно-крахмальная заварная мастика.

По пластичности она почти тождественна пластилину и после подсушки отлично сохраняет приданную ей форму. Поэтому из этой мастики предпочтительнее, чем из сырцовой, лепить вручную и делать при помощи форм самые разнообразные фигурки, цветы и другие объемные украшения.