Сельскохозяйственная биотехнология-стр.167

Сэнгер использовал ДНК-полимеразу I. В клетке этот фермент участвует в процессе репликации, заполняя пробелы между вновь синтезированными фрагментами ДНК (фрагментами Оказаки). Для работы фермента в пробирке требуются предшественники ДНК - дезоксирибонуклеотидтрифосфаты

(дНТФ), а также одноцепочечная матрица, на которой должен быть небольшой двуцепочечный участок - затравка, с которого начинается синтез.

Были синтезированы модифицированные предшественники - Дидезоксирибонуклеотиды для каждого из четырех оснований ДНК. ДНК-полимераза включает эти предшественники в ДНК.

Однако, включившись в ДНК, модифицированное основание не может образовать фосфодиэфирную связь со следующим дезокси-рибонуклеотидом. В результате рост (элонгация) данной цепи останавливается (терминируется) в том месте, где в ДНК включился дидезоксирибонуклеотид (ддНТФ). Поэтому их называют терминаторами элонгации.

Реакционная смесь по Сэнгеру состоит из цепи ДНК, нуклеотидную последовательность которой надо определить, короткого фрагмента меченой ДНК, комплементарной концевому отрезку этой цепи (затравка), одного из четырех ддНТФ и соответствующего дНТФ в строго определенном соотношении (чтобы они конкурировали), а также остальных трех дНТФ. Готовят четыре смеси, каждая из которых содержит один из четырех ддНТФ. В каждой из пробирок образуется набор меченых фрагментов, длина которых соответствует местоположению одного из четырех оснований. Меченые фрагменты ДНК разделяют в полиакриламидном геле (с точностью до одного нуклеотида), проводят радиоавтографию и по картине распределения фрагментов в четырех пробах устанавливают нуклеотидную последовательность ДНК (см. рис. 3.3).

Другие материалы

Оценка качества маргарина

Органолептическую оценку маргарина проводят не ранее чем через 24 ч после его выработки. Консистенция маргарина должна определяться при температуре 18 °С. Средняя проба маргарина массой до 200 г является средним образцом. Вкус и запах маргарина всех видов должны быть чистыми, молочными, с хорошо выраженным молочнокислым ароматом. Консистенция маргарина должна быть легкоплавкой, плотной, эластичной, однородной, поверхность среза - блестящей или слабо блестящей и сухой на вид. Цвет маргарина должен быть светло-желтым, однородным по всей массе.

Содержание влаги в зависимости от вида маргарина - не более 16-17 %, соли - 0,2-0,7 %, кислотность - не выше 2,5 °К. Температура плавления жира, выделенного из маргарина, 27-32 °С.

Дефекты, выявляемые органолептическим методом, обусловлены нарушением технологии производства и режима хранения:

  • невыраженный (пустой) вкус - результат недостаточного развития микрофлоры молока, применяемого для производства маргарина;
  • салистый и прогорклый привкусы - следствие плохого качества применяемого жирового сырья и неправильного хранения маргарина;
  • явно выраженный вкус растительного масла - результат использования недостаточно рафинированного масла;
  • нечистый вкус - результат плохой дезодорации жиров и неправильного хранения маргарина;
  • выступание на маргарине капель воды («слеза») - следствие плохого эмульгирования;
  • крошливая мягкая или твердая консистенция - результат нарушения технологического режима производства маргарина;
  • пестрота, «мраморность» массы - следствие плохой технологической обработки маргарина.