Пищевая химия-стр.322

- всегда, когда это осуществимо, необходимо тем или иным способом защищать активный центр фермента (например, обработка тиоловых ферментов глутатионом или цистеином);

- процедура промывания для удаления «непришитого» фермента не должна оказывать вредного влияния на иммобилизованный фермент;

- полимерная матрица не должна являться субстратом для иммобилизованного фермента;

- необходимо, наконец, учитывать механические свойства носителя, особенно его механическую прочность и физическую форму.

Процесс иммобилизации фермента можно продемонстрировать на примере связывания глюкоамилазы с носителем - ацетилэтилцеллю-лозой.

Носитель выдерживают сутки в дистиллированной воде для набухания. Далее к набухшей ацетил этил целлюлозе добавляют сначала натрий-ацетатный буфер с pH 5,5, а затем раствор очищенного фермента; после перемешивания к смеси добавляют поперечно-сшивающий агент - глу-таровый альдегид. Через несколько часов полученный препарат промывают последовательно натрий-ацетатным буфером и раствором хлористого натрия для удаления несорбированного на носителе фермента. Иммобилизованный таким образом фермент хранится под слоем воды или буфера при 3-5“С.

В настоящее время разработаны методы иммобилизации множества ферментов. Один и тот же фермент можно иммобилизировать несколькими методами. Например, глкжозоизомеразу из S. phaeochromogenes можно иммобилизовать на различных носителях, пористом алюминии, ДЭАЭ-целлюлозе, ДЭАЭ-крахмале и др. Лактатдегидрогеназу можно включить в гель, прикрепить к носителю поперечной сшивкой; аспара-гиназу - прикрепить к носителю сорбционным путем или химической (ковалентной) связью. В табл. 8.4 представлены некоторые методы иммобилизации для различных ферментов.

Другие материалы